在實驗設(shè)計前明確抗原，保證抗體的特異性和敏感性；2.確保IgG文庫中沒有雜散前體抗體；3.確保抗體制備步驟干凈嚴謹；4.確保培養(yǎng)基能提供足夠的營養(yǎng)以獲得正常表達的蛋白質(zhì)；5.合理確定抗原和蛋白質(zhì)濃度、抗原活性和其他細節(jié)；6.保證抗原蛋白的表達水平和穩(wěn)定性；7.調(diào)整培養(yǎng)基pH和抗原濃度，保證抗體的最佳表達。
1。從經(jīng)過特異性免疫的實驗動物中提取B細胞。2.通過動物細胞融合將B細胞和骨髓瘤細胞融合成雜交瘤細胞。3.用特異性選擇性培養(yǎng)基篩選能無限增殖并產(chǎn)生特異性的雜交瘤細胞。4.進行體內(nèi)或體外培養(yǎng)。體內(nèi)培養(yǎng)是指將雜交瘤細胞注入實驗動物腹腔，日后從腹水中提取。
Yao制備Monoclonal抗體首先需要獲得具有合成特異性的單克隆B淋巴細胞抗體但這樣的B淋巴細胞不能在體外生長。但發(fā)現(xiàn)骨髓瘤細胞可以在體外生長繁殖，通過細胞雜交技術(shù)將骨髓瘤細胞與免疫淋巴細胞結(jié)合可以獲得雜交骨髓瘤細胞。這個雜交細胞繼承了兩個親代細胞的特征。它既具有B淋巴細胞合成的特異性抗體又具有骨髓瘤細胞的體外持久性。使用這種來源于單一融合細胞的細胞群來培養(yǎng)和增殖can 制備抗一種抗原決定簇的特異性單克隆。
為了制備多克隆抗體，一般采用基于免疫球蛋白基因文庫的技術(shù)。注意事項包括:1。在實驗設(shè)計前明確抗原，保證抗體的特異性和敏感性；2.確保IgG文庫中沒有雜散前體抗體；3.確保抗體 制備步驟干凈嚴謹；4.確保培養(yǎng)基能提供足夠的營養(yǎng)以獲得正常表達的蛋白質(zhì)；5.合理確定抗原和蛋白質(zhì)濃度、抗原活性和其他細節(jié)；6.保證抗原蛋白的表達水平和穩(wěn)定性；7.調(diào)整培養(yǎng)基pH和抗原濃度，保證抗體的最佳表達。實驗原理是通過抗原識別抗體，從而增加免疫反應(yīng)的凝聚力，達到識別敏感微小物質(zhì)的目的。
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